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    您對透析胎牛血清了解多少?
    點擊次數:135 發布時間:2022-08-04

    細胞培養基作為細胞培養基的組成成分,胎牛血清為細胞生長提供激素、生長因子、結合蛋白、脂質、礦物質、黏附因子等物質,促進體外細胞培養。

    但在某些研究中,需要避免胎牛血清中一些小分子物質的影響,就需要用到特殊處理的血清——透析胎牛血清。

    今天從生產工藝以及應用角度,對透析胎牛血清進行介紹,幫助大家了解Ausbian透析胎牛血清有哪些特點。

    透析胎牛血清

    一、透析胎牛血清的生產工藝

    1、透析胎牛血清是在胎牛血清的基礎上進行加工的。

    胎牛血清在無菌條件下要經過多重過濾,進行一系列的檢測:

    理化性質檢查(如滲透壓和pH值)

    成分檢查(如內毒素和血紅蛋白)

    外源因子檢查(如細菌、病毒和支原體)

    促進細胞增殖的檢查等

    透析胎牛血清為保證其性能和安全性,也需具備胎牛血清的這些工藝和檢查。

    2、透析胎牛血清,需經過透析處理。

    在4°C下用特定的透析膜對血清在0.15M NaCl中透析。由于該透析膜只允許10 kDa以下的小分子穿過,在滲透壓的作用下,這些小分子便從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。10 kDa以下的小分子有化學小分子、核苷酸、某些激素、鹽、低分子量蛋白質、氨基酸、細胞因子、葡萄糖、殘留抗生素和其他外源分子。

    那么透析的效果如何?以及透析到何時呢?

    由于不可能監測全部小分子,因此常選用葡萄糖為代表。血清中葡萄糖<5 mg/dL,即可以停止透析了。透析過程中,除監測葡萄糖濃度外(可采用葡萄糖氧化酶方法測定),還需仔細監測pH值和滲透壓。

    3、該透析一般采用切向流過濾(tangential flow filtration)。

    也就是液體流動方向與過濾方向呈垂直方向的過濾形式。該方式使液體流動在濾膜表面產生剪切力,減小了濾膜上的物質堆積,保證了穩定的過濾速度。

    透析胎牛血清

    二、 透析胎牛血清的應用

    透析胎牛血清主要用于可能需要關注小分子濃度的特殊研究。這主要包括四個領域,其中有些領域是相互交叉的,透析胎牛血清應用廣泛,以下僅稍作舉例。

    蛋白質組學

    同位素標記

    細胞通訊

    報告基因細胞系的篩選

    1、 細胞培養條件下穩定同位素標記技術(簡稱SILAC)。

    這是一項以質譜為基礎的定量蛋白質組學技術,全稱為Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC)。它將13C或15N標記的氨基酸摻入到培養基中培養細胞,來標記細胞內新合成的蛋白質,一般培養5-6代,細胞中的蛋白質將都被同位素標記。然后質譜分析,即可比較經過不同處理的細胞,其內部蛋白質豐度的變化。它還可用于正常細胞與病理狀態細胞二者的比較。為避免胎牛血清中天然氨基酸的干擾,這時就需要用到透析胎牛血清,以保證摻入細胞蛋白中的氨基酸均為標記氨基酸(常采用賴氨酸或精氨酸)。

    2、工程細胞株的篩選。

    以常見的工程細胞株CHO-DFGRˉ為例,該細胞自身缺乏二氫葉酸還原酶(DHFR),必須在添加了次huang嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的培養液中才能得以存活。如將含有目的基因與DHFR基因的質粒轉染細胞,則可以得到在不含上述添加劑的培養基上也能生長的細胞克隆。通過甲氨蝶呤(MTX)進一步篩選,可進一步得到能表達大量目的蛋白的細胞克隆。這時的胎牛血清由于不含有次huang嘌呤和胸腺嘧啶等,也常作為選擇培養基的一部分,參與陽性轉染細胞克隆的篩選。

    3、研究某些因子如核苷酸或微量元素如硒、鋅對某種類型細胞增殖、分化的影響。

    這時也需要用透析胎牛血清,以避免培養體系中天然存在的這些物質的干擾。

    透析胎牛血清

    三、Ausbian透析胎牛血清

    作為一款備受實驗人員青睞的血清,Ausbian透析胎牛血清有以下優點:

    1、內毒素更低,細胞培養過程更健康。

    2、每批都有提供詳盡的檢測報告,各項檢測指標完整,清晰,實驗人員一目了然。

    3、從出廠到實驗室,全程冷鏈運輸,不出現凍融現象,血清質量能保證。

    4、有100ml和500ml大小兩種包裝,實驗人員選擇更方便。

    5、Ausbian®透析胎牛血清,到達國內后現貨才開始銷售,實驗室沒有國際貨運風險


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