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    “ 破解細胞生長慢,這幾個關鍵點你注意了嗎?(下)“
    點擊次數:107 發布時間:2022-08-09

    今天我們書接上回,接著講講另外3個關鍵點。

     

    公共設備可能存在問題

     

    儀器的參數

    也會影響細胞狀態

    如果細胞不存在污染,培養體系沒有瑕疵、細胞初始狀態也沒有問題,那么可以考慮公共儀器設備是否存在紕漏。

     

    常見有水浴鍋溫度、室內溫度及濕度、培養箱參數、水浴鍋溫度等。

     

    水浴鍋是細胞培養室常用的儀器,要定期用溫度計對其工作溫度進行檢查,觀察是否存在溫度不準、溫度驟變的情況。另外要強調一點,水浴鍋也是常見的污染源之一,水浴鍋中的水最好使用無菌水,并定期做好清潔工作,推薦大家使用MB WaterShield,可以有效清除、預防水槽中的支原體,方便安全、省時省力省心。

     

    細胞實驗室的溫度及濕度:儀器還是操作對溫度沒有特殊要求,維持舒適的溫度即可,比如18~26℃;過高的濕度會導致微生物的滋生,所以建議正常維持濕度在70%以下。應定期用溫度濕度測試儀對細胞實驗室進行檢測,以防溫控系統出現故障。

     

    培養箱參數:一般哺乳類與禽類細胞在體外培養的適宜溫度是37~38℃;大多數細胞適宜的pH范圍往往是7.2~7.4。在開放式培養中,以5%的二氧化碳氣體比例為宜。但在實際操作過程中,細胞培養箱有可能會出現以下故障,影響細胞培養體系,進而使細胞生長變得緩慢:

    • 溫度和溫度設定不準;

    • 細胞培養箱濕度不能維持;

    • 細胞培養箱的二氧化碳濃度不準。

    對應解決方法給大家整理好,建議大家保存,以備不時之需。


     

    實驗人員可能發生變化

     

    細胞“飼養員”的更換

    也可能影響細胞生長速率

    作為一名合格的細胞“飼養員”,一定要預先了解所養細胞的“習性”:用哪種培養法、使用何種類型培養體系(血清種類、基礎培養基類型、是否添加生長因子以及抗生素等),盡可能還原初始的培養環境,讓細胞有個適應的過程。另外,實驗者自身也要注意操作規范,按照標準流程培養。

     

    實驗試劑可能發生改變

     

    培養用的試劑

    也可能會是影響因素

    不同品牌的試劑可能會有些許差別,對于一些比較嬌貴的的細胞,這些細微的差別很可能會導致細胞生長受到影響。因此我們一直強調大家“追本溯源”,盡可能用與原來一致的培養條件。

     

    如果要更換試劑,建議大家先做個對照試驗,看看新的試劑對細胞生長有沒有影響。

     

    另外,除了以上這六點,還有一點需要特別注意,就是:

    細胞的代次

    一般來說,細胞傳代次數是一定的(一些癌細胞系屬于特例),特別是像間充質干細胞這類對代次比較敏感的細胞,需要格外注意,傳代次數過高后(10-15代左右),細胞生長速率也會明顯減慢。在實驗時,盡量選擇代次較低且狀態穩定的細胞。

     

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