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    細胞培養的基本步驟有哪些?
    點擊次數:164 發布時間:2022-08-10

    細胞培養技術指的是細胞在體外條件下的生長,在培養的過程中細胞不再形成組織(動物)。培養物是單個細胞或細胞群。細胞在培養時都要生活在人工環境中,由于環境的改變,細胞的移動或受一些其他因素的影響,培養時間加長,傳代導致細胞出現單一化型。

    一、細胞復蘇

    將凍存細2113胞從液氮5261中取出后,在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融4102化。移人15ml離心管中,加入10ml預熱1653的DMEM完全培養基,輕輕吹勻,離心,2000rpmX2min,棄上清液。

    加入10mlDMEM培養基清洗,棄上清液。加入10mlDMEM完全培養基,輕輕吹打,接種于10cm盤中,在含5%CO2的細胞培養箱中培養。

    二、細胞傳代

    細胞密度達到80%~90%時.去培養基,10mlPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人細胞培養箱3min。加人1mlDMEM完全培養基終止胰酶消化,轉移至15ml離心管。

    加入10mlPBS清洗細胞培養盤,轉移至15ml離心管,2000rpmX2min,棄上清液。再加入10mlPBS(經高壓滅菌,保存于40C),吹勻,吸取10微升進行計數,按照1×106/盤接種,在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。

    三、細胞凍存

    細胞密度達到80%~90%時,去培養基,10mlPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人細胞培養箱3min。加入lmlDMEM完全培養基終止胰酶消化,轉移至15ml離心管。加入10mlPBS清洗細胞培養盤,轉移至15ml離心管,2000rpmX2min,棄上清液。

    加入lml凍存液(90%血清,10%DMSO),放入凍存盒內(盒內有異丙醇,以保證溫度降低的速度),立即放入一80℃冰箱內,過夜,第二天放入液氮中,可以保存至少兩年,如不放人液氮,可以保存三個月。

    凍存液的配制:70%的完全培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。

    科研實驗中,細胞的體外培養一直是一個重要環節。細胞要養好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細胞培養,尤其適合難養細胞,如:干細胞、肝細胞,神經細胞,原代培養、細胞融合、轉染細胞等


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