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    支原體檢測方法有哪些?
    點擊次數:142 發布時間:2022-08-18

    支原體對細胞培養會帶來嚴重的危害,同時,它的發生率較高,肉眼不易察覺。有報道,在細胞培養室中,它的平均發生率甚至可高達63%。在生物制品中,它的發生率為1%~3%。

    污染細胞的支原體主要有五個方面的可能來源:

    1. 環境

    2. 被污染的細胞

    3. 人體表面的攜帶(如口腔、鼻腔、皮膚等)

    4. 實驗試劑,如培養基、胰酶等

    5. 未徹底消毒的實驗器具

    傳統的支原體檢測方法有哪些呢?

    方法一:培養法。直接將待測樣品涂布在支原體液體或固體培養基上,讓其生長,一般需要數周,才能看到菌液變渾濁或有菌落長出。 培養法是支原體檢測經典的方法,其優點是:靈敏度適中和結果可靠。但是培養法的一個主要缺點是時間周期太長,不適合作為細胞污染的快速檢測方法。

    方法二:DNA的熒光染色法。熒光染劑(如Hoechst 33258,DAPI)可以結合到細胞和支原體的DNA。被支原體污染的細胞經染色后,如果在細胞核外與細胞周圍可看到許多大小均一之熒光小點,即為支原體的DNA,則證明有支原體之污染。該法相對培養法快速,但是靈敏度較差。當用熒光染色法發現有支原體后,支原體的清除相對就較困難。

    方法三:掃描電鏡法。將細胞樣品進行掃描電鏡拍照,如果被支原體污染可以在細胞表面看到密密麻麻的小顆粒。該方法由于要使用電子顯微鏡,不適合用作實驗室常規檢測。

    方法四:PCR法。PCR法相對較快,靈敏度也較高。是目前實驗室常用的支原體檢測方法。但是PCR法也有自己的致命缺點:細胞培養液上清常含有強烈抑制PCR擴增的代謝產物。因為很多研究人員直接使用細胞培養液上清原液進行PCR檢測,如果檢測為陰性就認為沒有支原體污染。其實,還有一種可能性,就是PCR的擴增被細胞的代謝產物抑制了,而不是沒有支原體污染!

    通常來說,被污染的細胞應該丟棄,以避免成為污染源。但對于珍貴的細胞,以往別的品牌的支原體清除劑,其實只是抑制劑,它們抑制支原體的DNA合成和蛋白合成,但無法殺除。Mynox®是市面上一款具有殺滅作用的清除劑。它提取自枯草桿菌,可與支原體膜特異性結合,破壞膜通透性,導致支原體膨脹破裂而死。


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