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    文獻分享:如何為細胞挑選合適的血清?
    點擊次數:72 發布時間:2022-08-23

    牛血清是重要的細胞培養添加成分,具有終止胰蛋白酶消化,提供細胞生長所需的貼壁因子、免疫球蛋白、胰島素等其他營養物質的作用。

    根據采血時間的不同,牛血清通常分為:

    • 胎牛血清(采自5-8月胎齡)

    • 新生牛血清(采自出生0-7天內,也有說法是0-30天內)

    • 小牛血清(采自出生30天-1年)

    • 成牛血清(采自成牛)

    理論上,優質的胎牛血清在細胞培養方面通常優于其他類型的血清, 與新生牛和小牛血清相比,各類生長因子含量更為豐富,且由于5-8月胎牛沒有形成完整的補體系統,因此在使用的時候無需熱滅活。

    但是由于胎牛血清價格相對而言會更高一些,不同實驗對于血清的需求也不同,因此,如何挑選適合自己實驗的血清就顯得尤為重要。總的原則就是,綜合考慮各實驗室、生產企業的條件與所培養細胞類型。除了以往根據經驗和文獻報道,必要時也可進行針對特定細胞的血清篩選試驗,以篩選出最佳血清。

    今天我們來分享一篇國內研究人員發表在《生物學雜志》上的標題為《不同類型牛血清對MDCK細胞培養效果研究》的文獻,該研究對進口胎牛血清、國產胎牛血清、國產新生牛血清在MDCK 細胞培養過程中的促生長效果進行了闡述。

    研究方法

    作者在含10%不同類型牛血清的DMEM 培養液中連續傳代培養MDCK 細胞,比較了三種血清培養MDCK細胞的傳代穩定性、最大増殖密度、倍增時間、比生長速率、貼壁率等指標。

    1、貼壁培養傳代穩定性觀察

    分別用含有10%A、B、C血清的DMEM培養基復蘇MDCK工作庫細胞,待細胞生長至致密單層時,分別用含有3種類型血清的DMEM培養基培養并連續傳代10代,傳代時細胞均按照1∶6比例,置于5%CO2、37 ℃培養箱中。每代細胞在24和48 h拍照觀察細胞形態、長勢及致密程度。

    2、生長曲線及生長動力學分析

    取第4代3種類型血清培養生長狀態良好且鋪滿單層的MDCK細胞,計數稀釋至1×10^4 個/mL,接種于24孔細胞培養板,每孔接1 mL細胞懸液。將24孔細胞培養板放置5%CO2、37 ℃培養箱中進行培養,每24 h消化3孔計數,計算平均值。按照此方法,對培養至第6代、第9代的MDCK細胞重復該試驗2次,計算3次平均值,繪制細胞生長曲線。并比較3種類型血清培養MDCK細胞的最大増殖密度、倍增時間、比生長速率和平均比生長速率。

    3、貼壁率分析

    取第4代、第6代和第9代3種類型血清培養生長狀態良好且鋪滿單層的MDCK細胞,按1.2.1所述方法將細胞稀釋至1×10^3個/mL,制成50 cells/4 mL的細胞懸液,在6孔細胞培養板中每孔加入4 mL的細胞懸液,并做平行3孔。將6孔細胞培養板放置5%CO2、37 ℃培養箱中培養8 d,出現集落后,用吸管吸去培養液,用PBS清洗,無水甲醇固定,結晶紫染色。觀察并對細胞集落計數,計算平均值。

    4、細胞工廠擴大培養驗證

    取第10代C血清培養生長狀態良好且鋪滿單層的MDCK細胞,消化后計數,擴大培養至1層細胞工廠連續傳3代,加150 mL細胞培養液,接種密度為(8~9)×10^4 個/mL,置5%CO2、37 ℃培養箱,用上述方法,接種10層細胞工廠,加1.5 L細胞培養液,接種密度為(8~9)×10^4個/mL,每12 h用細胞工廠觀察臺觀察,待細胞長成致密單層后,繼續傳代培養3代,觀察細胞生長情況并在長成致密單層時消化計數。

    實驗結果

    • 在最大增殖密度和倍增時間上,胎牛血清均優于新生牛血清。

    • 在貼壁率方面[貼壁率(% ) = (所形成集落數/ 接種細胞數) ×100%],進口胎牛血清略高于國產胎牛血清,差異顯著;國產新生牛血清低于國產和進口胎牛血清,差異極顯著。

    總結

    對于生產或研究所用的培養細胞,大多數情況下,生產或研究人員可以依據以往經驗以及文獻報道選擇合適的血清。在個別不確定的情況下,也可參考以上文章的方法進行最適血清的篩選。

    參考文獻:

    [1]李自良,王家敏,趙彩紅,王美皓,李倬,喬自林,馬忠仁.不同類型牛血清對MDCK細胞培養效果研究[J].生物學雜志,2020,37(04):21-25.

    點擊文末閱讀原文,即可抵達相關文獻處。

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